分享:針對液相色譜柱常見(jiàn)幾種問(wèn)題的解決方案

　　1.柱壓?jiǎn)?wèn)題柱壓?jiǎn)?wèn)題是使用高效液相色譜過(guò)程中需要密切注意的地方，柱壓的穩定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時(shí)間等密切相關(guān)。

　　1.1壓力過(guò)高：

　　這是高效液相在使用中最常見(jiàn)的問(wèn)題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時(shí)，我們應該分段進(jìn)行檢查。

　?。?）首先斷開(kāi)真空泵的入口處，此時(shí)，PEEK管里充滿(mǎn)液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果，液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過(guò)濾頭堵塞。

　　處理方法：

　　用30%的硝酸浸泡半個(gè)小時(shí)，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過(guò)濾頭正常，再檢查；

　?。?）打開(kāi)Purge閥，使流動(dòng)相不經(jīng)過(guò)柱子，如果壓力沒(méi)有明顯下降，則是過(guò)濾白頭堵塞。

　　處理方法：

　　將過(guò)濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個(gè)小時(shí)。如果壓力降至100PSI（6.7Bar）以下，過(guò)濾白頭正常，再檢查；

　?。?）把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。

　　處理方法：

　　如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質(zhì)導致堵塞，則要用比現在流動(dòng)相更強的流動(dòng)相沖至壓力正常。

　　假如，按上面的方法長(cháng)時(shí)間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用流動(dòng)相沖洗柱子。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但是，一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以，盡量少用。

　　1.2壓力過(guò)低

　　壓力過(guò)低的現象一般是由于系統泄漏

　　處理方法：

　　尋找各個(gè)接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當然，還有一個(gè)原因就是泵里進(jìn)了空氣，但此時(shí)表現的往往是壓力不穩，忽高忽低，更嚴重一點(diǎn)會(huì )導致泵無(wú)法吸上液體。

　　處理方法：

　　打開(kāi)Purge閥，用3～5mL/min的流速沖洗，如果不行，則要用專(zhuān)用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

　　2.漂移問(wèn)題主要包括基線(xiàn)漂移和保留時(shí)間漂移。

　　2.1基線(xiàn)漂移

　　一般說(shuō)來(lái)，機器剛起動(dòng)時(shí)，基線(xiàn)容易漂移，大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間，如果，你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長(cháng)下（220nm）平衡時(shí)間相對會(huì )比較長(cháng)，但是，如果你在實(shí)驗過(guò)程中發(fā)現基線(xiàn)漂移，則你要考慮下面的原因：

　?、僮贤鉄裟芰坎蛔?。

　　解決方法：

　　更換新的紫外燈；

　?、谥鶞夭▌?dòng)。

　　解決方法：

　　控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開(kāi)的窗戶(hù)或空調對著(zhù)柱溫箱。

　?、哿魍ǔ乇晃廴净蛴袣怏w。

　　解決方法：

　　用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池（最好斷開(kāi)柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。

　?、芰鲃?dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。

　　解決方法：

　　檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑。

　?、輼悠分杏袕姳Ａ舻奈镔|(zhì)（高K'值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而，表現出一個(gè)逐步升高的基線(xiàn)。

　　解決方法：

　　使用保護柱，如有必要，在進(jìn)樣之間。在分析過(guò)程中，定期用強溶劑沖洗柱子。

　?、迿z測器沒(méi)有設定在最大吸收波長(cháng)處。

　　解決方法：

　　將波長(cháng)調整至最大吸收波長(cháng)處；

　?、吡鲃?dòng)相的pH值沒(méi)有調節好。

　　解決方法：

　　加適量的酸或堿調至最佳pH值；

　　2.2保留時(shí)間漂移

　　保留時(shí)間重現是液相性能好壞的一個(gè)重要標志，同一種東西，兩次的保留時(shí)間相差不要超過(guò)15s，超過(guò)了半分鐘可看做保留時(shí)間漂移，就無(wú)法進(jìn)行定性，你要考慮以下原因：

　?、贉乜夭划?。

　　解決方法：

　　調好柱溫，檢查是否有打開(kāi)的窗戶(hù)或空調對著(zhù)柱溫箱。

　?、诹鲃?dòng)相比例變化。

　　解決方法：

　　檢查四元泵的比例閥是否有故障。

　?、凵V柱沒(méi)有平衡。

　　解決方法：

　　在每一次運行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱。

　?、芰魉僮兓?。

　　解決方法：

　　重新設定流速。

　?、荼弥杏袣馀?。

　　解決方法：

　　從泵中除去氣泡。

　　2.3峰型異常問(wèn)題

　　峰型問(wèn)題是液相的主要問(wèn)題，在做液相過(guò)程中，我們就是要變換不同的條件來(lái)改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰，要區別對待，從主要問(wèn)題出發(fā)，一個(gè)一個(gè)加以解決。

　?、偎蟹寰鶠閷挿?。

　　解決方法：

　　系統未達到平衡；

　　溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多；

　　色譜柱尺寸及類(lèi)型選擇不正確；

　　色譜柱或保護柱被污染或柱效降低；

　　溫度變化造成的影響。

　?、谒龇灞阮A想的小。

　　解決方法：

　　樣品黏度過(guò)大；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；檢測器設置不正確，定量環(huán)體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現問(wèn)題。

　?、凵V圖中未出峰。

　　解決方法：

　　系統未進(jìn)樣或樣品分解；

　　泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確；

　　檢測器設置不正確；

　　針對以上情況成因作相應調整即可。。。

　?、芤粋€(gè)峰或幾個(gè)峰是負峰。

　　解決方法：

　　流動(dòng)相吸收本底高；進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。

　?、菟蟹寰鶠樨摲?。

　　解決方法：

　　信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒；

　　光學(xué)裝置尚未達到平衡。

　?、蕹霈F雙峰或肩峰。

　　解決方法：

　　進(jìn)樣量過(guò)大；樣品濃度過(guò)高；

　　保護柱或色譜柱柱頭堵塞；

　　保護拄或色譜柱污染或失效；

　　柱塌陷或形成短通道。

　?、咔吧旆?。

　　解決方法：

　　進(jìn)樣量或樣品濃度高；

　　溶解樣品的溶劑較流動(dòng)。