高效液相色譜柱的管理、保養及故障排查

　　本文從影響色譜柱使用壽命的幾個(gè)因素出發(fā)，從管理的角度，探討色譜柱的維護與保養。

　　01.色譜柱的類(lèi)型

　　常用的色譜柱填充劑有硅膠和化學(xué)鍵合硅膠、離子交換樹(shù)脂、凝膠或玻璃微球等填充劑。在化學(xué)鍵合硅膠中以十六烷基硅烷鍵合硅膠常用,辛基硅烷鍵合硅膠次之,氰基或氨基鍵合硅膠也有使用。近年來(lái),由于蛋白質(zhì)等生物大分子物質(zhì)分離提純技術(shù)的飛速發(fā)展,離子交換色譜柱、凝膠色譜柱的應用也越來(lái)越廣。

　　02.影響色譜柱使用壽命的因素

　　流動(dòng)相

　　在以水溶液為流動(dòng)相時(shí),水溶液中的微生物例如細菌容易生長(cháng),當用水溶液或有機酸緩沖液保護柱子時(shí),一些霉菌可能在色譜柱中滋生,堵塞固定相顆粒間的空隙。

　　由于濕法填充技術(shù)的問(wèn)世,目前普遍使用的色譜柱填料直徑一般都小于10um,流動(dòng)相中的顆粒雜質(zhì)很容易先沉積在柱頭然后慢慢堵塞柱子。

　　流動(dòng)相的pH值對色譜柱也有影響,特別是對化學(xué)鍵合硅膠填料,水溶液的pH最適范圍在2~7.5之間,當pH>8時(shí),硅膠會(huì )釋出生成絮狀物堵塞柱子,且難以復原,柱效很快降低,甚至*失效。

　　當在緩沖液中加入有機溶劑例如甲醇或乙腈時(shí),鹽類(lèi)的溶解度下降,會(huì )析出鹽沉淀,堵塞柱子。同時(shí)流動(dòng)相中的有機溶劑和鹽會(huì )腐蝕色譜柱頭的篩板,產(chǎn)生柱頭凹陷。

　　流動(dòng)相的極性對柱子也有一定影響,對于硅膠柱,甲醇、水、冰乙酸等極性較大物質(zhì)會(huì )破壞填料,反之,對于化學(xué)鍵合硅膠,極性小的物質(zhì)如正丁醇、二氯甲烷等也起同樣的作用。堿性溶液會(huì )破壞陽(yáng)離子交換樹(shù)脂色譜柱,而酸性溶液容易損壞陰離子交換樹(shù)脂柱。

　　樣品和固定相

　　如果有少量或微量的樣品不能夠溶解在流動(dòng)相中,在通過(guò)固定相會(huì )堵塞柱子。樣品中的顆粒雜質(zhì)也會(huì )堵塞柱子。樣品組分例如糖、蛋白質(zhì)等通過(guò)柱子時(shí)會(huì )產(chǎn)生不可逆吸附,這樣固定相的活性點(diǎn)被覆蓋。

　　樣品組分還會(huì )與固定相產(chǎn)生反應,尤其是對于氨基柱的影響較為嚴重,因為氨基易與酐、酮形成希夫(Schiff)縮合而減少活性點(diǎn),使保留時(shí)間縮短。

　　色譜柱鍵合相基團脫落、固定相分解和活性基團變性以及會(huì )影響柱效和保留時(shí)間的顯著(zhù)改變。大多數鍵合相都是通過(guò)硅氧硅鍵(Si-O-Si)連接在硅基質(zhì)上,形成帶有有機基團的固定相Si-O-Si-R(R為CnH2n+1),硅氧硅鍵可能在水溶液中水解而斷裂,使鍵合基團脫落。

　　03.高效液相色譜柱的管理

　　色譜柱的管理

　　制定色譜柱管理的標準操作規程并嚴格執行。每一根新購進(jìn)的色譜柱必須造冊登記,內容包括:生產(chǎn)公司、品名、型號、規格、購進(jìn)時(shí)間、啟用時(shí)間、單價(jià)、柱內保護溶液等。色譜柱分類(lèi)存放,硅膠柱、化學(xué)鍵合硅膠柱、氰基或氨基柱、離子交換樹(shù)脂柱、凝膠柱各用一個(gè)色譜柱盒,盒上貼上標簽,注明類(lèi)別。

　　隨柱說(shuō)明書(shū)裝入密實(shí)袋附在登記本上。每啟用一根色譜柱,在色譜柱上貼上標簽,注明啟用日期。

　　每根柱子每?jì)蓚€(gè)月保養一次,特別是對于一些使用頻率少的柱子,因為放置時(shí)間長(cháng),容易干柱,每一次做好保養記錄。

　　對于確已失效的柱子,做好停用記錄,不能隨意丟棄,專(zhuān)門(mén)存放,如果現用的柱子的填料需要填補,可以用存放的柱子的填料。在從事生產(chǎn)的單位的質(zhì)檢部門(mén),對于使用時(shí)間較長(cháng)柱效降低的柱子,可把它用于檢測產(chǎn)品的中間體。

　　色譜柱的保養

　　色譜柱使用一段時(shí)間后,常遇到柱子被污染,柱效會(huì )有一定程度的下降,采用適當的方法對色譜柱進(jìn)行保護,可以延長(cháng)色譜柱的使用壽命。